母液配方(第四课:培养基组分介绍及配置方法)

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母液配方(第四课:培养基组分介绍及配置方法)

通过前面的学习,我们知道植物细胞全能性的表达与否,必须要同时具备两个因素:1、离体状态下的细胞或组织。2、施加外部的影响因数。其中外部的影响因素即培养基的组分设计和外源激素配比。植物组织培养的成功与否很大取决对培养基的选择,培养基的种类和成分直接影响到培养材料的生长和分化,故应该根据培养植物的种类和部位选择合适的培养基。

植物组织培养中所使用的基本培养基主要有MS、改良MS、B5、N6等一二十种,最常用的是MS,大部分的基本培养基都是在MS培养基组分的基础上进行改良以达到符合特定植物的生长需要。其中培养基还可以分为基本培养基和完全培养基,完全培养基是在基本培养基的基础上,根据各种不同的培养要求,添加各种植物生长调节剂,如生长素、分裂素、玉米素、有机添加物等。

即用型的MS基本培养基(省去母液配置环节直接可按照说明使用)

在配置培养基时入股添加适量的凝固剂如琼脂则成为固体培养基,如果不添加凝固剂即称为液体培养基。固体和液体培养基各有一些优缺点。固体培养基的最大优点是简单、使用方便一般只要有培养室和高压灭菌锅及接种台就可以开展工作。但是缺点是培养物必须固定在一个位置上,只有底部才能接触到培养基,接触部分才能吸收到养分不接触则不能吸收营养成分,同时因为气体交换不畅,培养过程中植物新陈代谢的废物积累容易造成自我毒害,必须及时转移,而液体培养基需要使用到摇床之类的设备,通过震荡培养,给培养物提供了良好的通气条件,有利于培养物的生长发育,避免了固体培养基的缺点,尽管如此,固体培养基因为其简便高效的特性还是普遍被采用。

植物组织培养过程中植物生长发育需要多种营养和生长调节物质,当其缺乏时,生长发育受阻,形态不正常。其中的营养物质和生长因子主要靠培养基供给,因此完全培养基的成分除了水分以外,还要包括:一:无机营养、二:有机营养、三:生长调节物质;四:有及添加物(香蕉、椰汁、土豆等)。具体在组织培养工厂中会把培养基的基础母液分为这几大类:1、大量元素;2、有机物;3;微量元素;4、铁盐;5、生长调节物质(即植物激素)。其中大量元素、微量元素、铁盐属于无机营养类,有机物物属于有机物类。需要着重说明的是任何的植物组织培养基都需要碳源,其中的碳源来源都来自于糖类,糖类也归为有机物类,理论上葡萄糖更适合植物生长的需要,但是在实际生产工厂中基本都用蔗糖代替葡萄糖,主要是节省成本的目的,植物的生长液并无太明显的影响,所以在配置任何植物组织培养基的同时碳源是必须添加的,以蔗糖为例用量基本上市30g/L或者20g/L。有机添加物的添加与否根据具体的生产配方决定,在兰花组培行业中常用椰汁,在铁皮石斛组培行业中常用土豆,在金线莲组培行业中常用香蕉。

MS基本培养基配方

MS基本培养基配方

还有一种生长调节物质其实就是植物激素,是植物细胞接受特定环境信号诱导产生的、低浓度时可调节植物生理反应的活性物质。在细胞分裂与伸长、组织与器官分化、开花与结实、成熟与衰老、休眠与萌发以及离体组织培养等方面,分别或相互协调地调控植物的生长发育与分化。即生长素(auxin)、赤霉素(GA)、细胞分裂素(CTK)、脱落酸(abscisic acid,ABA)、乙烯(ethylene,ETH)和油菜素甾醇(brassinosteroid,BR)。我们最常用的是生长素和细胞分裂素,其他种类用得不多。

生长素常用的有吲哚乙酸(IAA)、吲哚丁酸(IBA)、萘乙酸(NAA)、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D),它们的作用强弱顺序是2,4-D>NAA>IBA>IAA。2,4-D主要用于初代培养,启动细胞脱分化,再分化往往不用2,4-D,而用另外三种,在生根阶段多用IBA。

细胞分裂素常用的有激动素(KT)、6-苄基腺嘌呤(6-BA),其中作用强弱6-BA>KT,主要作用是出尽细胞分裂扩大;抑制茎的生长,而使茎增粗;解除顶端优势,诱导芽的分化,促进侧芽萌发。

植物激素

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